产品货号:
BTN90408
中文名称:
荧光定量PCR Mix(染料法)
英文名称:
2×SYBR qPCR Mix
产品规格:
1mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本制品是基于荧光染料检测的即用型PCR试剂盒,可以对靶片段进行实时定量PCR分析。产品含有经过优化的缓冲液组分、Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2及SYBR Green I等所有实时定量PCR所需要的成分,用户只需加入模板和引物即可进行实时定量PCR反应,具有广泛的用途。
- 方便,用户只需准备模板和引物即可以进行实时定量PCR实验。
- 产品为2×PCR反应预配液,操作步骤已经最大限度地简化,能减少污染,降低实验误差。
- 扩增效率和灵敏度更高。
- 快捷,即用型的预配液使加样操作步骤简化,避免了交叉污染,降低实验误差。
- 各成分的浓度和比例都经过精心优化,反应的灵敏度高,特异性强。
组分 | 规格 |
2×SYBR qPCR Mix | 1mL |
说明书 | 1份 |
保存:-20℃,有效期1年。
- 如果有N个样品(最好含一个样本制备阳性对照和一个样本制备阴性对照)并且做定量分析,最好设置N+7个反应,多出的7个中,6个用于6点标准曲线,一个是扩增阴性对照(NC)。在N+7个PCR管中,加入下列成分。如果是做定性分析,则6个做标准曲线的样品缩减成一个扩增阳性对照(PC),用户自己需要根据下表进行适当修改(把6个标曲反应改成1个阳性对照反应)。
成分 N个样品管 6个标准曲线管 NC管 2×染料法qPCR MasterMix 各10μL 各10μL 10μL 自备引物1(10μM) 各1μL 各1μL 1μL 自备引物2(10μM) 各1μL 各1μL 1μL 模板DNA
(自备)基因组DNA 10~100ng 不加 不加 cDNA 1~10ng 不加 不加 自备阳性对照模板(6各梯度) 不加 各1μL 不加 阴性对照模板(一般用水) 不加 不加 1μL 自备50×ROX I或ROX II染料 各0.4μL 各0.4μL 0.4μL 超纯水 至20μL 至20μL 至20μL - 放入荧光PCR仪中进行扩增,下表的扩增参数仅供参考。
步骤 温度 时间 备注 预变性 95℃ 5分钟 PCR反应
(35-45循环)94℃ 10秒 55~65℃ 15~30秒 靶分子长度最好在80~200bp 72℃ 40秒 采集SYBR通道的荧光信号 溶解曲线分析 按qPCR仪器手册执行 - 通过溶解曲线分析的结果排除无效数据。有Ct值,但Tm值跟扩增阳性对照Tm不一样的样品(包括对照和待测样品),归为假阳性,数据无效,不予以分析。Tm跟扩增阳性对照Tm一致的,为有效Ct。
- 如果两种阴性对照(样本制备阴性对照和扩增阴性对照)的溶解曲线所得Tm值跟扩增阳性对照的Tm值一样,说明环境或试剂可能有过去的PCR扩增产物污染,则此次实验无效,需要解决污染问题再进行实验。
- 如果两种阴性对照(样品制备阴性对照和PCR阴性对照)是假阳性,可以继续分析其它样品有效数据。
- 对定量检测,以6个标准曲线样品的浓度的log值为横轴,以有效Ct值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的有效Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值,再换算出待测样品的DNA浓度。
- 对定性检测,则得到有效Ct值的样本为阳性,无有效Ct值的为阴性。
附录1:关于ROX使用
下列信息仅供参考,具体以qPCR仪器的使用手册为准。
- 不需要ROX的机型:Agilent MX3000和MX4000、iCycler IQ、LightCycler 480、Smart Cycler System、Thermal Cycler Dice Real Time System等型号的荧光PCR仪器不需要加ROX染料,但加入的话也不会影响整个PCR分析。
- 需要使用ROX I的机型:ABI Prism7000、7300、7700、7900HT、Step One、Step One Plus。
- 需要使用ROX II的机型:ABI Prism7500、7500 Fast、MJ Opticon、MJ Chromo4、Corbett RotorGene 3000。
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